小鼠源基于MLV-10A1逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細胞系          

產(chǎn)品名稱：PT-67

規(guī)格：1×10⁶  T25/瓶

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

相關(guān)細胞如下

小鼠肝實質(zhì)細胞 AML-12 D/F12+10%FBS+1%ITS（10ug/mL胰島素；轉(zhuǎn)鐵蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒）+40ng/ml地塞米松+1%P/S 貼壁生長

小鼠氣道平滑肌細胞 ASMC 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞 G422 DMEM+10%FBS+1%P/S 懸浮生長

小鼠精原細胞系 GC-1 spg DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠主動脈內(nèi)皮細胞 MAEC M199+5%FBS+5ng/ml VEGF+1%P/S 貼壁生長

小鼠骨樣細胞 MLO-Y4 MEMa+5%FBS+5%小牛血清+1%P/S  鼠尾膠原包被 貼壁生長

小鼠肺上皮細胞 MLE-12 DMEM/F12+1%ITS（10ug/mL胰島素；轉(zhuǎn)鐵蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒）+10nM氫化的松+10nM雌二醇+10mM hepes+ 2mM L-谷氨酰胺+2%胎牛血清 貼壁生長

小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細胞 IMCD3 DMEM/F12+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠胚胎成纖維細胞 3T3-L1 DMEM（含NAHCO3 1.5g/L)+10%小牛血清+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長

小鼠乳腺癌細胞 4T1  1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠乳腺癌細胞熒光素酶標記 4T1+luc 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠巨噬細胞 Ana-1 1640+10%FBS+1%P/S 懸浮生長

小鼠黑色素瘤細胞 B16 1640（或IMDM）+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠黑色素瘤細胞 B16-F10 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記 B16-F10+LUC DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠原B細胞株 BAF3 1640+10FBS+10ng/ml IL-3（鼠源）+1%P/S   懸浮生長

小鼠胚胎成纖維細胞 BALB/3T3 clone A31 DMEM+10%FBS+1%P/S  生長慢傳代密度要大 貼壁生長

小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株 bEnd.3 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠胰島素瘤胰島Beta細胞 Beta-TC-6 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+15%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠小膠質(zhì)細胞 BV2 DMEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1% HEPES+1%P/S 貼壁生長

小鼠神經(jīng)干細胞 C17.2 DMEM+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

小鼠成肌細胞 C2C12 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠胚胎成纖維細胞 C3H/10T1/2 Clone8   MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠結(jié)腸癌細胞 CT26  1640+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 CT26+LUC 1640+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠結(jié)腸癌細胞 CT26.WT  1640+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠胚胎干細胞 E14 DMEM+15%FBS+0.1uL/mL LIF+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%PS+1uL/mLβ－巰基乙醇+1%P/S  培養(yǎng)瓶用0.1%明膠包被細胞呈集落生長 貼壁生長

小鼠淋巴瘤細胞 EL-4 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%馬血清(或FBS)+1%P/S 懸浮生長

小鼠乳腺癌細胞 EMT6 1640+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠膠質(zhì)細胞瘤 GL-261 DMEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1% HEPES+1%P/S 貼壁生長

小鼠膠質(zhì)細胞瘤熒光素酶標記 GL-261+luc DMEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1% HEPES+1%P/S 貼壁生長

小鼠乳腺上皮細胞 HC11 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 貼壁生長

小鼠肝癌細胞 HEPA1-6 DMEM（含NaHCO3 1.5g/L+10%FBS+1%丙酮酸納+1%P/S 貼壁生長

小鼠肝癌細胞熒光素酶標記 HEPA1-6+LUC DMEM（含NaHCO3 1.5g/L+10%FBS+1%丙酮酸納+1%P/S 貼壁生長

小鼠海馬神經(jīng)元細胞 HT22 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠卵巢上皮癌細胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠單核巨噬細胞 J774A.1 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠骨肉瘤成骨細胞 K7M2WT (K7M2-wt) DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠肺癌細胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠淋巴瘤細胞 L5178Y TK+/- clone (3.7.2C) DMEM+10%FBS+1%P/S 懸浮生長

小鼠成纖維細胞 L929 MEM+10%HS(馬血清）+1%P/S 貼壁生長

小鼠胰腺癌細胞 LTPA MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細胞 MA-891 1640+10% FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠膀胱癌細胞 MB49 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠結(jié)腸癌細胞 MC38 DMEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1% HEPES+1%P/S 貼壁生長

小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 MC38+LUC DMEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1% HEPES+1%P/S 貼壁生長

小鼠胚胎成骨細胞 MC3T3-E1 MEMα+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14 MC3T3-E1subclone 14 MEMα(添加NaHCO3 1.5g/L+肌醇 43.2mg/L+葉酸 8.82mg/L+β-巰基乙醇 7.8mg/L)+ FBS 10%+P/S 1% 貼壁生長

小鼠胚胎成纖維細胞 MEF D/F12+10%FBS+1%P/S  (非永生化) 貼壁生長

小鼠胚胎成纖維細胞 MEF(絲霉素C處理) D/F12+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠前胃癌細胞 MFC 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠正常肝細胞 NCTC1469（NCTC CLONE 1469） DMEM +10%馬血清+1%P/S 貼壁生長

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞 neuro-2a MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

小鼠胚胎細胞 NIH/3T3 DMEM+10%小牛血清+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1%L-谷氨酰胺+1%P/S 貼壁生長

小鼠骨髓基質(zhì)細胞 OP9 MEMα+20%FBS +1%P/S 貼壁生長細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002）

人誘導多能干細胞 iPS *培養(yǎng)基500ml++細胞消化液500ml+復(fù)蘇專用因子1mg+matrix基質(zhì)膠5ML

人子宮內(nèi)膜癌細胞 Ishikawa MEM+15%FBS+1%NEAA+1%P/S

人正常卵巢上皮細胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S

人胚肺成纖維細胞 IMR-90 MEM+20%FBS+1%P/S

人急性T細胞白血病細胞 J.gamma1 1640+10%FBS+1%P/S

人膀胱移行細胞癌 J82 MEM+10%FBS+1%P/S

人胎盤絨毛癌細胞 JAR 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人胰腺癌細胞 JF-305 1640+10%FBS+1%P/S

人絨毛膜癌細胞 JEG-3 MEM+10%FBS+1%P/S

人T淋巴細胞白血病細胞 Jurkat（clone E6-1） 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人慢性骨髓性白血病細胞系 K562 IMDM + 10%FBS+1%P/S

人K562耐阿霉素細胞株 K562/ADR 1640+10%FBS+1%P/S+1ug/mlADR

人口腔表皮癌細胞 KB MEM+10%FBS +1%P/S

人急性髓性白血病細胞 KG-1a IMDM + 10%FBS+1%P/S

人卵巢顆粒細胞瘤細胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S

人外周血嗜堿性白血病細胞 KU812 1640+10%FBS+1%P/S  

人食道癌細胞 kyse30 48%1640+48%F-12+2%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

人肝癌細胞 Li-7 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人膠質(zhì)瘤細胞 LN229 DMEM+5%FBS+1%P/S  

人前列腺癌細胞 LNCaP clone FGC 1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人結(jié)直腸癌細胞 lovo F12K+10%FBS+1%P/S

人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標記 LOVO+LUC F12K+10%FBS+1%P/S

人結(jié)直腸腺癌細胞 LS174T  MEM+10%FBS+1%P/S

人結(jié)直腸癌細胞 LS180 MEM+10%FBS+1%P/S 該細胞不能使用胰酶消化

人結(jié)直腸癌細胞 LS513 1640+10%FBS+1%P/S

人肝星形細胞 LX-2 1640+10%FBS+1%P/S

人乳腺上皮細胞 MCF-10A MEGM kit（五管因子）+100ng/ml霍亂毒素（終止消化用刀豆蛋白酶）+1%P/S

人乳腺癌細胞 MCF-7 MEM+10%FBS+0.01mg/mL胰島素+1%P/S

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞 MCF-7/Adr 1640+10%FBS+0.01mg/mL胰島素+1%PS+500ng/mL ADR

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MCF-7+luc MEM+10%FBS+0.01mg/mL胰島素+1%P/S

人乳腺細胞 MDA-KB2 L15+10%FBS +1%P/S

人乳腺癌細胞 MDA-MB-231 L15+10%FBS +1%P/S

人乳腺癌X細胞+GFP MDA-MB-231+GFP L15+10%FBS+1%P/S

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MDA-MB-231+LUC L15+10%FBS+1%P/S

人乳腺癌細胞 MDA-MB-361 L15+20%FBS+1%P/S

人黑素瘤細胞 MDA-MB-435S L15+10%FBS+0.01mg/ml胰島素+0.01mg/ml谷胱甘肽+1%P/S

人乳腺癌細胞 MDA-MB-436 L15+10%FBS+0.01mg/ml胰島素+16ug/ml谷胱甘肽

人乳腺癌細胞 MDA-MB-453 L15+10%FBS+1%P/S

人乳腺癌細胞 MDA-MB-468 L15 +10%FBS+1%P/S

人子宮頸表皮癌細胞 ME-180 MCCOY'S 5A+10%FBS +1%P/S  

人膜間皮細胞 MET-5A M199+NaHCO3 1.5g/L+3.3 nM EGF+400 nM 氫化的松+20 mM HEPES++1%ITS（10ug/mL胰島素；轉(zhuǎn)鐵蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒）+10%FBS+1%PS

人骨肉瘤細胞 MG63 MEM+10%FBS+1%P/S

人胃癌細胞 MGC-803 1640+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞 MHCC-97H DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞熒光素酶標記 MHCC-97H+luc DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞 MHCC-97L DMEM+10%FBS+1%P/S

細胞培養(yǎng)注意事項：

一、污染防控

細胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和細胞系間交叉污染的防控。

實驗中需保持良好的操作習慣，所用材料的位置擺放要順手，污染源和已滅菌物品要分開放置。實驗室也需定期清潔與消毒。

二、血清與培養(yǎng)基

通常血清的添加比例為10%，當然也可根據(jù)細胞狀態(tài)和生長速率適當增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時，最好需對血清的品質(zhì)進行驗證，防止對實驗造成影響。

對于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如若需自配培養(yǎng)基時，過濾前攪拌時間不宜過長（培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富，細菌常溫下20min就可繁殖一代，其代謝產(chǎn)物會對培養(yǎng)基的品質(zhì)產(chǎn)生影響）。培養(yǎng)基過濾除菌后，應(yīng)對培養(yǎng)基進行無菌驗證，防止污染。

三、細胞培養(yǎng)瓶

目前商品化的細胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當回旋瓶蓋，保證CO₂能順利進入細胞培養(yǎng)瓶。

細胞培養(yǎng)過程中，對于適應(yīng)能力強的腫瘤細胞，可在傳代3-4次后更換新的細胞培養(yǎng)瓶。對于非腫瘤細胞系如293T，HEK293等細胞，建議每次傳代更換新的細胞培養(yǎng)瓶來保證細胞狀態(tài)。

四、細胞傳代

正常細胞形態(tài)較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細胞增殖狀況良好。當貼壁細胞長到密度90%時，需進行傳代。

傳代時通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進行細胞傳代。

濕消化法：待細胞變圓，肉眼觀察下成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代。

吹打細胞時，手法要輕柔，避免吹打出氣泡，造成細胞因內(nèi)外壓差破裂，同時需避免刮到瓶壁影響細胞的貼壁。

不同細胞的貼壁能力不同，消化時間不同；不同細胞細胞間連接強度不一樣，消化時間不同；同一細胞生長狀狀況不同，消化時間不同。消化時適時觀察細胞形態(tài)，避免因過度消化影響細胞活性。

       傳代間隔時間和傳代比例因細胞而異。細胞傳代過程中，當細胞出現(xiàn)狀態(tài)不好或者污染時及時棄去細胞，重新復(fù)蘇。

五、細胞凍存與復(fù)蘇

當細胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時，需及時大量的凍存。

細胞凍存液比例為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1。細胞凍存密度通常為1-3×10⁶個/ml。細胞凍存采用慢凍方式，減少冰晶形成，避免細胞損傷。通常4℃放置0.5 h，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

細胞復(fù)蘇時升溫要快，防止在解凍過程中水分進入細胞，形成冰晶，影響細胞存活。38℃水浴不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中。

細胞死亡術(shù)語：

失巢凋亡：貼壁細胞中的凋亡，由于缺乏基質(zhì)互作導致的，可能是一個主要的抑癌機制。

凋亡，外在途徑：胞外信號誘導的程序性細胞死亡，起始于跨膜受體(包括FAS)的連接反應(yīng)。

凋亡，內(nèi)在途徑：程序性細胞死亡，可能依賴或不依賴caspase，特征是線粒體膜電位的改變。

自噬細胞死亡：細胞質(zhì)液泡化，伴隨胞質(zhì)內(nèi)容的無差別分解代謝。

鐵死亡：鐵依賴、非凋亡、氧化細胞死亡，由半胱氨酸吸收激發(fā)的。

壞死性凋亡：壞死的程序性形式，特征表現(xiàn)為當caspase-8被抑制時，TNFR1通過RIP1進行信號傳遞。

壞死：不成熟的細胞死亡，往往發(fā)生于感染或損傷。

依賴性細胞死亡：通過過量的聚合酶活性消耗ATP和NAD+。

部分拆除/角化：細胞結(jié)構(gòu)和功能的久性修飾，通常依賴于caspase。比如紅細胞摘除術(shù)、晶狀體纖維的形成和表皮細胞角質(zhì)化。

細胞焦亡：炎癥條件下，caspase-1介導的凋亡，是機體一種重要的天然免疫反應(yīng)，在抗擊感染中發(fā)揮重要作用。

繼發(fā)性壞死：凋亡發(fā)生后的壞死，通常見于細胞培養(yǎng)過程。

在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種：1.復(fù)蘇不易成功2.細胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細胞生長緩慢，當你的細胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸，不妨試一試以下幾種解決辦法。

1、復(fù)蘇難以成功

原因：RAW264.7對空間十分敏感，復(fù)蘇密度太高，細胞增殖太快，加劇細胞營養(yǎng)缺失，加速細胞老化。

解決辦法：T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細胞數(shù)量控制在104~105

2、細胞變異明顯

原因：細胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促使該細胞呈現(xiàn)梭形、長梭形

解決辦法：改善細胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌，換flask培養(yǎng)瓶，采用一次性器具，使用質(zhì)量較高的胎牛血清

3、消化困難

原因：細胞老化后，細胞偽足多且長，使細胞難消化，使用胰酶或細胞刮會對細胞損傷較大

解決辦法：無需胰酶使用吸管重復(fù)吹打，可消化大部分正常狀態(tài)的細胞；但若細胞為“長腳"狀態(tài)，即使加入胰酶消化超過10min，也難以消化下來，勉強消化，對后續(xù)的實驗數(shù)據(jù)也有較大影響。

4、生長緩慢

原因：支原體污染會導致細胞生長緩慢，甚至難以貼壁

解決辦法：定期進行支原體檢測，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，即刻使用支原體去除試劑

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