OVCAR-8+luc 人卵巢癌腺癌細胞熒光素酶標記

細胞介紹

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶LUC基因。

細胞特性

1）來源：卵巢

2）形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3）含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為已經(jīng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LUC的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其LUC熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素wan全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的wan全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥wan全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10X,20X）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的wan全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的wan全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                       

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）yi蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5.客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術問題可以聯(lián)系我們售后，隨時給予解答。

A2780+GFP 人卵巢癌細胞+GFP相關熱賣細胞

人肺癌細胞+RFP A549+RFP

 人肺癌細胞熒光素酶標記 A549+luc

人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細胞吉西他濱耐藥株 AsPC-1/GEM

 人膽囊癌細胞熒光素酶標記 GBC-SD+LUC

人永生化表皮細胞熒光素酶標記 HACAT+LUC

人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標記 HCC827+LUC

人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 HCT116+LUC

人結(jié)直腸癌氟niao嘧啶耐藥株 HCT15/Fu

人結(jié)直腸癌zishan醇耐藥株 HCT-15/Taxol

人宮頸癌細胞熒光素酶標記 HELA+LUC  

人胃癌細胞黃色熒光標記 HGC-27+YFP

人真皮成纖維細胞（原代細胞永生化） HSF(SV40)

人臍靜脈內(nèi)皮細胞（原代細胞永生化） HUVEC

人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+RFP HUVEC+RFP

人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP HUVEC+GFP

人結(jié)直腸癌細胞氟niao嘧啶耐藥株 LOVO/5FU

人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標記 LOVO+LUC

人肝星形細胞+GFP LX-2+GFP

人乳腺癌阿mei素耐藥細胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MCF-7+luc

人乳腺癌X細胞+GFP MDA-MB-231+GFP

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MDA-MB-231+LUC

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞熒光素酶標記 MHCC-97H+luc

人胃癌細胞熒光素酶標記 NCI-N87+LUC

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

人神經(jīng)母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

人乳腺癌細胞 SK-BR-3+LUC

人皮膚黑色素瘤細胞熒光素酶標記 SK-MEL-2+LUC

人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC

人結(jié)直腸腺癌細胞+luc SW620+luc

人結(jié)直腸腺癌細胞+GFP SW620+GFP

人結(jié)直腸癌細胞氟niao嘧啶耐藥株 SW620/5FU

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫cuo胺細胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫cuo胺細胞熒光素酶標記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤+RFP U87MG+RFP

云南宣威人肺腺癌細胞系+GFP XWLC-05+GFP

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 ZR-75-1+luc

小鼠乳腺癌細胞熒光素酶標記 4T1+luc

小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記 B16-F10+LUC

小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 CT26+LUC

小鼠膠質(zhì)細胞瘤熒光素酶標記 GL-261+luc

小鼠肝癌細胞熒光素酶標記 HEPA1-6+LUC

小鼠卵巢上皮癌細胞熒光素酶標記 ID8+LUC

小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC

小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 LLC+LUC

小鼠結(jié)腸癌細胞熒光素酶標記 MC38+LUC

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞熒光素酶標記 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌細胞熒光素酶標記 panc02+LUC

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞+GFP RAW 264.7+GFP

小鼠前列腺癌細胞熒光素酶標記 RM-1+LUC

大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞綠色熒光標記 C6+LUC

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸?。?/span>

鴨胚胎成纖維細胞 Duck embryo

人膽囊上皮細胞永生化

人胰腺癌相關成纖維細胞永生化

人胰腺癌細胞永生化

人膽囊上皮細胞永生化+GFP GFP

C57小鼠巨噬細胞永生化

豬扁桃體上皮細胞永生化

人風濕性關節(jié)滑膜成纖維細胞永生化

豬脂肪干細胞永生化

鴨胚肝間質(zhì)細胞永生化

羊睪丸間質(zhì)細胞永生化

兔肝間質(zhì)細胞永生化

人頸靜脈球瘤細胞永生化

人主動脈內(nèi)皮細胞永生化