WRL68人正常肝細(xì)胞

MEM+10%FBS

貼壁

上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞培養(yǎng)基本知識

一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么？

收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張），排除細(xì)胞本身污染的情況。

02何時須更換培養(yǎng)基？

視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。

03細(xì)胞何時進(jìn)行傳代較好？

一般情況下細(xì)胞生長至*匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個要求不宜生長過密（也就是常說的長老了），但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會引起細(xì)胞分化。

04貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代？

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細(xì)胞，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓，細(xì)胞間隙明顯，部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右*培養(yǎng)液混勻終止消化，將細(xì)胞小心吹打下來，1000 rpm/min室溫離心5min；棄上清，細(xì)胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細(xì)胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

05懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細(xì)胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清，細(xì)胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細(xì)胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加*培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團生長，此時細(xì)胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)補液時，需避免反復(fù)吹打。

06貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶？

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時，易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，常規(guī)細(xì)胞傳代時建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化，對于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化，細(xì)胞密度過高超過80%時，采用分步消化法。胰酶儲存在–20°C，解凍在4°C進(jìn)行，第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20°C，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機會。

07如何控制胰酶消化時間？

胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個關(guān)鍵步驟：消化過度細(xì)胞碎片增多，黑渣子增多，細(xì)胞會成片脫落，嚴(yán)重影響細(xì)胞活性，并有部分細(xì)胞漂浮，隨棄去的胰酶流失；消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下，反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性。

不同細(xì)胞對消化液的敏感性不同，胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度，是否含EDTA，胰酶的儲存時間，胰酶的儲存溫度，是否反復(fù)凍融，消化加入的胰酶體積，消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。消化對于新購買的細(xì)胞，建議客戶先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時間，可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓，記錄最佳消化時間，下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1R

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1S

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4

人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5（有限細(xì)胞系）

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MT-4

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 MUM2B

人前B急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 NALM-6

人畸胎癌細(xì)胞 NCCIT

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299

人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1395

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H157

人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650[H1650]（MKN-1）

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1703

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1944

人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1975

人肺癌細(xì)胞 NCI-H2126

人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H226

人肺癌細(xì)胞 NCI-H23

人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292

人腎上腺皮質(zhì)細(xì)腺癌細(xì)胞 NCI-H295R

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H358

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460 [H460]

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661[h661]

人胃癌細(xì)胞 NCI-N87

人胃癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 NCI-N87+LUC

人膽囊癌細(xì)胞 NOZ

人腎癌細(xì)胞 OS-RC-2

人卵巢腺癌細(xì)胞 OVCAR-3

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 P53R [JHU-56]  

人胰腺癌細(xì)胞 Panc 03.27

人胰腺癌上皮細(xì)胞 Panc 05.04

人胰腺癌細(xì)胞 PANC-1

人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株 PANC-1/GEM

人胰腺癌細(xì)胞 PANC10.05

人胰腺癌細(xì)胞 PATU8988t（PATU8988）

人胰腺癌細(xì)胞 PATU8988S

人前列腺癌 PC-3

人肺癌細(xì)胞 pc-9

人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞 PL45

人肝癌細(xì)胞 PLC/PRF/5

人胚腎細(xì)胞 ProPakA.6

人正常肝細(xì)胞 QSG-7701

人淋巴瘤細(xì)胞 Raji

人B淋巴瘤細(xì)胞 RAMOS RA1

人肝膽管癌細(xì)胞 RBE

人橫紋肌肉瘤細(xì)胞 RD

人急性非B非T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 REH

人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 RL95-2

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 RPMI8226

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 RKO

人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤 RT4

人前列腺正常細(xì)胞 RWPE-1

人前列腺正常細(xì)胞 RWPE-2

人小細(xì)胞肺癌 SBC-2

人膀胱鱗癌細(xì)胞 SCaBER

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

人子宮頸鱗癌細(xì)胞 SIHa

人乳腺癌細(xì)胞 SK-BR-3

人乳腺癌細(xì)胞 SK-BR-3+IUC

人肝腹水腺癌細(xì)胞 SK-HEP-1

人低分化肺腺癌細(xì)胞 SK-LU-1

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞 SK-MEL-2

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-MEL-2+LUC

人肺鱗癌細(xì)胞 SK-MES-1

人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞 SK-N-MC

人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SK-NEP-1

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SK-N-SH

人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC

人肝癌細(xì)胞 smmc-7721

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19

人肝癌細(xì)胞 snu-1

人肝癌細(xì)胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化細(xì)胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤細(xì)胞 SW982 [SW-982]

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116

人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW-13

人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW1353

人胰腺癌細(xì)胞 SW1990

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480

人甲狀腺癌細(xì)胞 SW579

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 SW620

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP SW620+GFP

142140210 SW620/5FU

人膀胱移行細(xì)胞癌 SW780

人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 T24

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 T47D

人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 T98G

人食管癌細(xì)胞 TE-1

人食管癌細(xì)胞 TE-12

人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 thp-1

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905

人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株 TPC-1

人甲狀腺癌細(xì)胞 TT

人喉癌細(xì)胞 TU212

人喉癌細(xì)胞 TU-138

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U118MG（U-118MG）

人成骨肉瘤細(xì)胞 U-2 OS

人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 U251 MG (KO)

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤細(xì)胞 U266

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U87MG

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤細(xì)胞 U-937

人膀胱移行細(xì)胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌細(xì)胞 VCAP

人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 WERI-RB-1

人黑素瘤細(xì)胞 WM-115

人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞 WPMY-1

人正常肝細(xì)胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系+GFP XWLC-05+GFP

人膽囊癌細(xì)胞系 ZJU-0430

人膽囊癌細(xì)胞系熒光素酶標(biāo)記 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌細(xì)胞 ZR-75-1

WRL68人正常肝細(xì)胞

巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的 重要對象。巨噬細(xì)胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì) 胞群，在條件適宜下可生活 2－3 周，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存。

巨噬細(xì)胞也建有無限細(xì)胞系，大多來自小鼠，如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均獲惡性，培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難 以建株。

培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來源來獲取細(xì)胞， 以小鼠腹腔取材法最為實用， 其法如下：1、實驗前三天，向小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯 lml（勿注入腸內(nèi)！，以 ） 刺流產(chǎn)生大量的巨噬細(xì)胞。

2、引頸處死小鼠。

3、手提鼠尾將其全浸入 70%乙醇中 3－5 秒。

4、置動物于解剖臺，用針頭固定四肢，持鑷撕開腹部皮膚，但勿傷及腹膜壁， 把皮膚拉向上下兩側(cè)，暴露出腹膜壁。

5、用 70%酒精擦洗腹膜壁，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同時用手指從 兩側(cè)壓揉腹膜壁，使液體在腹腔內(nèi)流動。

6、 用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側(cè)． 使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。

7、小心拔出針頭，把液體注入離心管。

8、4℃下 250g 離心 10 分鐘后，去上清，加 10ml Eagle 培養(yǎng)基。

9、計數(shù)細(xì)胞。每只鼠可產(chǎn)生 20 一 30×106 細(xì)胞，其中 90%為巨噬細(xì)胞。

10、以 3×105 個貼附細(xì)胞/平方厘米接種。

11、接種數(shù)小時后，除去培養(yǎng)液，可去除其它白細(xì)胞，純化培養(yǎng)細(xì)胞，用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培養(yǎng)液置 CO2 溫箱中。

豬腎細(xì)胞系 LLC-PK-1 DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

豬腎細(xì)胞系 PK-13 DMEM+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞 PIEC 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長