人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞EA.hy926

蘇州千舍生物，細(xì)胞培養(yǎng)試劑，常備國內(nèi)外品牌血清/胎牛血清，擁有完善的細(xì)胞庫管理體系，供應(yīng)上萬種類細(xì)胞株細(xì)胞系，公司細(xì)胞技術(shù)60%為碩士和博士學(xué)歷，其中明星產(chǎn)品有：DC2.4細(xì)胞、RAW264.7細(xì)胞、COV434細(xì)胞、HO-8910細(xì)胞、A2780細(xì)胞、SK-OV-3細(xì)胞、OVCAR-3細(xì)胞、OVCA433細(xì)胞、HEK-293-6e細(xì)胞、FRO細(xì)胞、HEPG2.2.15細(xì)胞、HL-7702細(xì)胞、L-02細(xì)胞、M-ICC12細(xì)胞、143B細(xì)胞、HOS細(xì)胞、M4e細(xì)胞、M2e細(xì)胞、TU686細(xì)胞、TU212細(xì)胞、vero細(xì)胞、SW48細(xì)胞、SW480細(xì)胞、NCCIT細(xì)胞、B16-F10細(xì)胞、HK-1細(xì)胞、Hep2細(xì)胞、C666-1細(xì)胞、HNE1細(xì)胞、HNE1/DDP細(xì)胞、capan-1細(xì)胞、vero e6細(xì)胞、A375細(xì)胞、Hs294T細(xì)胞、HSC-LX-2細(xì)胞、LOVO細(xì)胞、MKN-28細(xì)胞、RL952細(xì)胞、Hela細(xì)胞、A549細(xì)胞、Ishikawa細(xì)胞、EBC-1細(xì)胞、H1993細(xì)胞、H1993細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞、NCI-H441細(xì)胞、LS174T細(xì)胞、NCCIT細(xì)胞、capan-1細(xì)胞、Hep3B細(xì)胞、HUVEC細(xì)胞、SW116細(xì)胞等。

  我公司以客戶為核心，以產(chǎn)品質(zhì)量求生存，以售后服務(wù)求信譽(yù)。我們通過不斷改進(jìn)來提高效率，絕不以犧牲品質(zhì)作為代價(jià)。“誠信、創(chuàng)新、嚴(yán)謹(jǐn)、專業(yè)”愿以飽滿的熱情期待各界朋友攜手合作，共創(chuàng)輝煌！

人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞EA.hy926幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品

⒈ BME(basal medium eagle)基礎(chǔ)培養(yǎng)基

⒉ MEM

⒊ DMEM

⒋ IMDM

⒌ RPMI-1640

⒍ M199

⒎ Mccoy's 5A

⒏ F10 F12 DMEM混合F12(三)幾種常用細(xì)胞培養(yǎng)配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶液等)

五、細(xì)胞傳代培養(yǎng)（消化法）

具體操作：

（一）傳代前準(zhǔn)備

1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且可減少污染。

4.點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。？？？

6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。

7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭

顯微鏡

的臺(tái)面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。

（二）胰蛋白酶消化

1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞最好，最佳消化溫度是37℃。

2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。

（三）吹打分散細(xì)胞

1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

2.吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

（四）分裝稀釋細(xì)胞

1.分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計(jì)數(shù)。注意密度過小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。最后要做好標(biāo)記。

（五）繼續(xù)培養(yǎng)

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。傳代細(xì)胞2小時(shí)后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25％時(shí)為一個(gè)＋，占50％為＋＋，占75％時(shí)為＋＋＋。

傳代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

1.嚴(yán)格的無菌操作

2.適度消化：消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。

附：EDTA（0.02％乙二胺四乙酸二鈉）消化液配方：EDTA 0.20g，NaCl 8.00g， KCl 0.20g， KH2PO4 0.02g， 葡萄糖 2.00g，0.5％酚紅4ml，加入蒸餾水定容至1000ml。10磅20min高壓滅菌，使用時(shí)調(diào)節(jié)PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要*清洗，否則再培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞容易脫壁。

六、細(xì)胞的復(fù)蘇

細(xì)胞復(fù)蘇的原則--快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。

人乳腺癌細(xì)胞+LUC細(xì)胞，MCF-7+Luc人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 DM

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 HSR

人結(jié)腸癌細(xì)胞 CW-2

結(jié)腸癌細(xì)胞 cx-1

人肝癌細(xì)胞 hepg2.2.15

人肝癌細(xì)胞 Hep3B2.1-7 [Hep3B]

人肝癌細(xì)胞 HEPG2

人肝癌細(xì)胞人肝癌(HBV) HEPG2.2.15

人 SV40  轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞 HFOB1.19

人胃癌細(xì)胞 HGC-27

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 HK-2

人腎上皮細(xì)胞 HKb-20

人早幼粒白血病細(xì)胞 HL 60（hl-60）

人肝細(xì)胞 HL-7702[L-02]

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞 HO-8910PM

人骨肉瘤細(xì)胞 HOS

人胰腺癌細(xì)胞 HPAC

人胎盤細(xì)胞（有限細(xì)胞系） Hs 815.Pl

人乳腺癌細(xì)胞 HS578T

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 HS683

人真皮成纖維細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HSF(SV40)

人纖維肉瘤細(xì)胞 HT-1080

人膀胱癌細(xì)胞 HT-1376

人結(jié)腸癌細(xì)胞 HT-29 (HT29)

人眼小梁網(wǎng)細(xì)胞 HTMC

人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞 HPNE

人肝癌細(xì)胞 huh-7

人肝癌細(xì)胞 huh-7.5.1

人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 HUT-78

人十二脂腸腺癌 HUTU-80

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HUVEC

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUV-EC-C

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC-RFP

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC-GFP

人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 iPS

人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 Ishikawa

人正常卵巢上皮細(xì)胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN）

人胚肺成纖維細(xì)胞 IMR-90

人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞 J.gamma1

人膀胱移行細(xì)胞癌 J82

人胎盤絨毛癌細(xì)胞 JAR

人胰腺癌細(xì)胞 JF-305

人絨毛膜癌細(xì)胞 JEG-3

人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 Jurkat（clone E6-1）

人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系 K562

人K562耐阿霉素細(xì)胞株 K562/ADR

人口腔表皮癌細(xì)胞 KB

人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 KNS-89

人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞 KU812

人食道癌細(xì)胞 kyse30

人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 LN229

人前列腺癌細(xì)胞 LNCaP clone FGC

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 lovo

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 LS174T

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS513

人肝星形細(xì)胞 LX-2

人乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A

人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MCF-7+luc

人乳腺細(xì)胞 MDA-KB2

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231-LUC

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-361

人黑素瘤細(xì)胞 MDA-MB-435S

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-436

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-453

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-468

人膜間皮細(xì)胞 MET-5A

人骨肉瘤細(xì)胞 MG63

人胃癌細(xì)胞 MGC-803

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97H

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97L

人胰腺癌細(xì)胞 MIA-PACA-2

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4

人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5（有限細(xì)胞系）

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MT-4