產(chǎn)品名稱(chēng)：人結(jié)腸癌細(xì)胞COLO205   

細(xì)胞規(guī)格：1-3×10^6細(xì)胞量

庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：RPMI-1640+10% FBS

運(yùn)輸方式：常溫順豐運(yùn)輸和干冰順豐運(yùn)輸

貨 期：復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周，凍存細(xì)胞的需要3-5天（特殊情況會(huì)有說(shuō)明）

質(zhì) 控：無(wú)支原體、無(wú)污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

研究范圍：僅供科研使用

人結(jié)腸癌細(xì)胞COLO205，我司主要經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品是國(guó)內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無(wú)外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無(wú)血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿(mǎn)的熱情歡迎新老客戶(hù)選購(gòu)！

在細(xì)胞體外培養(yǎng)的過(guò)程中，離開(kāi)機(jī)體保護(hù)的細(xì)胞是很脆弱的，在陌生的生長(zhǎng)環(huán)境下即便是培養(yǎng)條件的輕微改變，也可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生無(wú)法預(yù)估的影響。在原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，即使保持培養(yǎng)條件*一致，在傳代過(guò)程中，細(xì)胞的存活質(zhì)量也是逐漸下降的。

以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC細(xì)胞）為例，HUVEC細(xì)胞是研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞功能的經(jīng)典體外細(xì)胞模型。在心血管疾病的研究中，主要用于研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞功能改變或損傷后其衍生細(xì)胞因子對(duì)血壓的影響；在腫瘤研究中，主要用于實(shí)體瘤中血管生成的研究。然而，HUVEC在傳代培養(yǎng)過(guò)程中，其活力是逐漸衰退的，因此細(xì)胞傳代多不超過(guò)10代。

傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)主要是通過(guò)顯微鏡下形態(tài)學(xué)變化以及傳代培養(yǎng)周期的變化預(yù)估細(xì)胞生長(zhǎng)生存狀態(tài)。這種主觀(guān)判斷既無(wú)法量化，也無(wú)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。因此，目前對(duì)細(xì)胞存活質(zhì)量的判斷并沒(méi)有準(zhǔn)確、客觀(guān)的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，并且對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的存活質(zhì)量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定。

體外細(xì)胞的有效培養(yǎng)新概念——“細(xì)胞質(zhì)控”。通過(guò)細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖及DNA損傷五方面對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)生存狀態(tài)進(jìn)行全fang位的監(jiān)控。

在這五個(gè)方面中，影響大的便是細(xì)胞活力，蘇州千舍生物教你如何判斷細(xì)胞活力。在體外細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，細(xì)胞總有一些因各種原因而死亡，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比，即是我們常說(shuō)的細(xì)胞活力。“細(xì)胞質(zhì)控”中基礎(chǔ)的指標(biāo)便是細(xì)胞活力。常見(jiàn)的流式細(xì)胞設(shè)備及部分細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器都可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，還可以提供準(zhǔn)確、客觀(guān)的細(xì)胞活力數(shù)據(jù)，為“細(xì)胞質(zhì)控”提供準(zhǔn)確、客觀(guān)的統(tǒng)計(jì)學(xué)依據(jù)，細(xì)胞活力評(píng)估并不困難！

只要滿(mǎn)足以下兩個(gè)條件就可以進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)，正常細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的。

Propidium iodide（PI碘化丙啶）是一種核酸染料，常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)和流式細(xì)胞儀分析。PI不能通過(guò)正常完整的細(xì)胞膜，故細(xì)胞在處于壞死或晚期凋亡時(shí)細(xì)胞膜被破壞，這時(shí)可為PI著紅色，可以用來(lái)分辨壞死細(xì)胞/正常細(xì)胞。

加入另一種可以透過(guò)細(xì)胞膜的核酸染料，就可以通過(guò)兩種染料將活細(xì)胞和死細(xì)胞區(qū)分開(kāi)。

PI經(jīng)常被用來(lái)與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535 nm和615 nm。

細(xì)胞活力的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)界定

應(yīng)用案例：納米藥物毒性測(cè)試

納米藥物的研究是近年來(lái)新藥研發(fā)的熱點(diǎn)。納米藥物載體篩選的首要標(biāo)準(zhǔn)是檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞的毒性。而在細(xì)胞毒性測(cè)試中，首先要排除的是基底培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的死細(xì)胞，即“噪音信號(hào)”。在對(duì)新型納米藥物載體SEONLA的研究中，Zaloga等人認(rèn)為只有活細(xì)胞比例超過(guò)90%方可進(jìn)行細(xì)胞毒性研究，細(xì)胞質(zhì)控的重要性由此可見(jiàn)一斑。

細(xì)胞毒性的入門(mén)級(jí)指標(biāo)是細(xì)胞活力。判斷一種物質(zhì)（化合物、小分子藥物或蛋白質(zhì)等）對(duì)細(xì)胞的毒性首先要觀(guān)察的是其是否或誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，即細(xì)胞活力的變化。以維生素C為例，研究發(fā)現(xiàn)，高濃度維生素C對(duì)眼癌細(xì)胞Y79 Retinoblastoma Cells具有殺傷作用。文章中，作者以眼癌常用化療藥Melphalan作為對(duì)照，對(duì)經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞活性進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)，隨著濃度的升高，維生素C對(duì)Y79 Retinoblastoma Cells殺傷作用逐漸增強(qiáng)，并且維生素C對(duì)眼癌細(xì)胞的殺傷作用優(yōu)于Melphalan。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果為眼癌更安全、更有效的治療方案的提出提供了理論依據(jù)。

除了細(xì)胞毒性研究，細(xì)胞質(zhì)控在病毒感染或者RNA轉(zhuǎn)染的研究中也是非常重要的。在這一類(lèi)研究中，轉(zhuǎn)染/感染試劑或多或少都會(huì)對(duì)細(xì)胞已有一定殺傷作用。因此，在轉(zhuǎn)染之前，活細(xì)胞需要達(dá)到一定的比例才可以保證在轉(zhuǎn)染之后有足夠數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)的研究。而這一比例需要實(shí)驗(yàn)條件摸索才能確定。

怎樣算是消化好了呢？不需要把細(xì)胞全部消化成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀(guān)察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了。

一般能移動(dòng)了，說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了（雖然沒(méi)有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

細(xì)胞就是*成單個(gè)細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過(guò)程中仍然會(huì)聚集，這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性，你可以嘗試，準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液，貼壁后觀(guān)察細(xì)胞，仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。

一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要過(guò)幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái)，即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞），吹打不超過(guò)20次（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個(gè)細(xì)胞左右）是正常的，不要再去延長(zhǎng)消化時(shí)間，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。

比較難消化的細(xì)胞：潤(rùn)洗方法5min還不能消化，以結(jié)腸癌細(xì)胞為例，比如HCT15、LS411和KM12細(xì)胞，胰酶消化，一般10 cm 培養(yǎng)皿，一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過(guò)5min，即可見(jiàn)細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。

常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，受消化影響不是很大：如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化的話(huà)（難消化細(xì)胞例外）。但少數(shù)實(shí)驗(yàn)，比如病毒包裝，對(duì)細(xì)胞代數(shù)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個(gè)時(shí)候，胰酶消化，就是潤(rùn)洗，都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性，來(lái)使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。

EDTA的作用：許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，胰酶切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過(guò)螯合Ca離子，作用于整聯(lián)蛋白的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對(duì)付特別難消化的細(xì)胞，添加多一些EDTA，就是這個(gè)道理。一般不要試圖延長(zhǎng)消化時(shí)間（如果10min還消化不*的話(huà)），而應(yīng)該想其它辦法。

PBS洗滌：消化之前用PBS洗滌，是常見(jiàn)的操作，因?yàn)檠逯泻幸种埔让傅牡鞍?。?duì)于一些難消化細(xì)胞，可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制胰酶的活性。但對(duì)于絕大部分細(xì)胞用胰酶或者EDTA溶液潤(rùn)洗即可消化，不需要配制不含Ca，Mg離子的溶液。

每段時(shí)間定期對(duì)細(xì)胞房、培養(yǎng)箱&水盤(pán)、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個(gè)角落細(xì)菌、真菌等微生物的清除，每次操作完都整理好細(xì)胞房，帶好手套、口罩、鞋套，防止人為因素污染。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞

Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細(xì)胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞

B16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細(xì)胞

F9 小鼠畸胎瘤細(xì)胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮細(xì)胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細(xì)胞

BV2 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞  

DC2.4小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞

U14 小鼠子宮頸癌細(xì)胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細(xì)胞

mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

HL-1小鼠心肌細(xì)胞

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞

hepa1-6 小鼠肝癌細(xì)胞

SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞

HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系

MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

mpc5小鼠足細(xì)胞

4T1 小鼠乳腺癌細(xì)胞

ANA-1小鼠巨噬細(xì)胞

TM4 小鼠睪丸支持細(xì)胞

STO 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞

H9C2 大鼠心肌細(xì)胞

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌細(xì)胞

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞

RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細(xì)胞

INS-1 大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞

NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞

BHK-21 倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞

PK-15 豬腎細(xì)胞

Duckembyro 鴨胚胎成纖維細(xì)胞

vero 綠猴腎細(xì)胞

Hep3B人肝癌細(xì)胞

HPAC人胰腺癌細(xì)胞

HT-1376 人膀胱癌細(xì)胞

JAR 人胎盤(pán)絨毛癌細(xì)胞

KNS-89 人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養(yǎng)基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養(yǎng)基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02