蘇州千舍生物教你六招使用ELISA試劑盒

一、實驗原理

    用于免疫酶技術(shù)的酶有很多，如過氧化物酶，堿性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰膽堿酯酶，6－磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶，堿性磷酸酯酶等，其中尤以辣根過氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng)，在呈色后須立刻測定，否則空氣中的氧化作用使顏色加深，無法準(zhǔn)確地定量。 
     辣根過氧化物酶（HRP）是一種糖蛋白，每個分子含有一個氯化血紅素（protonhemin）區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的吸收峰是275nm，所以酶的濃度和純度計算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶濃度以 mg/ml 計算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP純度（RZ）=A403nm/A275nm純度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大說明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右，高可達3.4。用于ELISA檢測的HRP的RZ值要求在3.0以上。 

   我司主要銷售細胞培養(yǎng)試劑，胎牛血清、人血清、人AB血清、培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、sigma試劑、試劑盒等優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，對售出去的產(chǎn)品，售后完善。

  說到ELISA試劑盒，相信科研朋友們都不會陌生。ELISA試劑盒的誕生，是為了幫助科研工作者省掉繁瑣的實驗過程，提高科研效率。如果選對了試劑盒，用對了實驗技巧，就會讓您的實驗效率事半功倍。將為您解析ELISA試劑盒六大使用技巧，請收下！

1、查找待測樣本的蛋白濃度：可以通過NCBI的文獻，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達量參考值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致；

2、試劑盒的應(yīng)用種屬、檢測樣本的種類：除試劑盒特別說明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；

3、試劑盒的檢測范圍：也就是標(biāo)曲范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標(biāo)曲范圍內(nèi)，對于濃度很高的樣本，可以先進行預(yù)實驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。

Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03 、馬血清SH30074.03 、烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級別胎牛血清 04-002-1A 、

BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A 。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE。

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 、Gemini特級胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1、雙抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

4、試劑盒中的稀釋線性及回收率：

A、稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性，參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的稀釋倍數(shù)；

B、稀釋線性也有做加標(biāo)稀釋線性的情況，加標(biāo)稀釋線性是將標(biāo)準(zhǔn)品加入樣本中測定加入的標(biāo)準(zhǔn)品濃度測定是否準(zhǔn)確，同樣也是確定待測樣本稀釋倍數(shù)的參考指標(biāo)。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適；

5、試劑盒的其它指標(biāo)：

A、靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本zui低濃度的能力，如果待檢指標(biāo)含量很低，需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒；

B、板間和板內(nèi)的變異系數(shù)（CV%）:反映板內(nèi)和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。

6、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準(zhǔn)備時間需要考慮到試劑盒的有效期。

    我公司ELISA試劑盒，均經(jīng)過充分測試，以保證*的品質(zhì)和可重復(fù)性。這種即用型的ELISA試劑盒，含有ELISA實驗所需的全部試劑和耗材，并通過精心挑選抗體對，及優(yōu)化配方稀釋液，確保結(jié)果具有無以倫比的準(zhǔn)確性。如果您對我公司的胎牛血清、人血清、人AB血清、無外泌體血清SBI、新生牛血清等產(chǎn)品感興趣，歡迎咨詢訂購！